Analisa Kuantitatif Karbohidrat Part III

By All About Knowledge at September 06, 2017

Karbohidrat dengan zat tertentu akan menghasilkan warna tertentu yg dapat dgunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif. Sebelumnya telah saya jelaskan mengenai analisa kualitatif, sekarang akan saya jelaskan mengenai analisa kuantitatif.

Beberapa reaksi yg lebih spesifik dpt membedakan golongan karbohidrat. Banyak cara untuk mengetahui atau mengidentifikasi karbohidrat dalam suatu bahan alam, diantaranya adalah sebagai berikut:

 

5. Analisis Total Pati, Amilosa, Amilopektin

Kandungan pati dalam bahan pangan dapat ditentukan secara volumetrik/titrimetri atau kolorimetri. Penentuan total pati adalah dengan cara menghidrolisis pati secara sempurna menjadi glukosa.

Hidrolisis pati menjadi gula dapat terjadi saat ada perlakuan asam yaitu memecah ikatan glikosidik yang menghubungkan antar glukosa. Dapat juga terjadi secara enzimatis (enzim α-amilase dan glukoamilase) yang memecah molekul-molekul amilosa dan amilopektinn menjadi gula sederhana.

Kandungan glukosa dapat ditentukan menggunakan metode penetapan gula seperti metode Anthrone, metode fenol, metode Lane-Eynon, metode Nelson-Somogyi. Kandungan pati ditentukan menggunakan fakor pengali (0,9). Sehingga kandungan pati adalah kandungan glukosa x 0,9. Dapat ditentukan untuk analisis kadar pati pada contoh padat atau cair.

 

Prosedur Kerja Analisis Total Pati

Persiapan Contoh :

1.      Masukkan sebanyak 2 – 5 g contoh padat atau cair ke dalam gelas (untuk contoh padat perlu dihaluskan dahulu)

2.      Tambahkan ke dalam gelas piala sebanyak 50 ml alkohol 80%. Aduk selama 1 jam

3.      Saring suspensi yang terbentuk dengan kertas saring dan cuci dengan air sampai volume filtrat 250 ml (filtrat ini mengandung karbohidrat yang larut dan dibuang)

4.      Untuk menghilangakn lemak, cuci pati yang terdapat sebagai residu dengan 10 ml eter (sebanyak 5 kali). Saring setiap pencucian dengan kertas saring. Biarkan menguap eter yang tersisa dalam residu.

5.      Cuci lagi residu dengan 150 ml alkohol 10% untuk membebaskan lebih lanjut karbohidrat yang terlarut.

6.      Pindahkan residu secara kuantitatif dari kertas saring ke dalam gelas piala dengan cara pencucian dengan 200 ml air. Tambahkan 20 ml HCl 25%.

7.      Tutup suspensi residu di dalam gelas piala dengan pendinginan balik (kondensor).

8.      Setelah didinginkan, netralkan larutan yang terbentuk dengan larutan NaOH 45% dan masukkan ke dalam labu takar 500 ml secara kuantitatif.

9.      Tepatkan larutan sampai tanda tera dengan menggunakan air destilat.

10.    Saring kembali larutan dengan menggunakan kertas saring.

 

Analisis contoh :

Filtrate diperoleh dari persiapan contoh dianalisis kadar glukosa dengan menggunakan analisis gula pereduksi (metode Lane – Eynon atau Nelson - Somogyi).

 

Perhitungan

Berat pati dalam contoh diperoleh dengan mengalikan berat glukosa dengan 0,9. Angka 0,9 adalah factor konversi untuk pembentukan glukosa dari hidrolisis pati.

 

 

Prosedur Kerja Analisis Amilosa

Pembuatan kurva standar

1.      Timbang sebanyak 40 mg amilosa murni dan masukkan ke dalam tabung reaksi.

2.      Tambahkan ke dalam tabung reaksi 1 ml etanol 95% dan 9 ml NaOH 1N.

3.      Panaskan tabung reaksi di dalam air mendidih sekitar 10 menit sampai semua amilosa membentuk gel.

4.      Setelah didinginkan, pindahkan campuran secara kuantitatif ke dalam labu takar 100ml dan tepatkan dengan air sampai tanda tera

5.      Pipet gel amilosa (beberapa seri konsentrasi) ke dalam labu takar 100ml

6.      Tambahkan ke dalam masing – masing labu takar asam asetat 1N, kemudian tambahkan masing – masing 2 ml larutan iod.

7.      Tepatkan larutan iod dengan air hingga tanda tera.

8.      Setelah didiamkan selama 20 menit, ukur absorbans dari intensitas warna biru dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 625 nm.

9.      Buat kurva standar sebagai hubungan antara kadar amilosa (sumbu x) dengan absorbans (sumbu y)

 

Analisis contoh :

1.      Gunakan contoh tepung yang mengandung pati (apabila contoh mengandung komponen lain maka pati perlu diekstrak dahulu)

2.      Timbang sebanyak 100mg contoh dan masukkan ke dalam tabung reaksi

3.      Tambahkan ke dalam tabung reaksi 1ml etanol 95% dan 9ml NaOH 1 N.

4.      Panaskan tabung reaksi selama 10 menit untuk menggelatinisasi pati

5.      Setelah didinginkan, masukkan pasta pati ke dalam labu takar 100ml dan tepatkan hingga tanda tera dengan menggunakan air

6.      Pipet larutan pati tersebut dan dimasukkan ke dalam labu takar 100ml, lalu ditambahkan asam asetat 1N, 2 ml larutan iod, dan air hingga tanda tera

7.      Setelah didiamkan selama 20 menit, ukur absorbansinya dengan spektrofotometer pada 625 nm.

 

Kandungan amilosa ditentukan berdasarkan kemampuan amilosa untuk bereaksi dengan senyawa iod yang menghasilkan kompleks berwarna biru. Intensitas warna biru tergantung pada kadar amilosa dan dapat ditentukan secara spektofotometri. Kandungan amilopektin ditentukan sebagai selisih antara kandungan pati dengan amilosa.

Pati = amilosa + amilopektin

 

Perhitungan dalam menentukan berat pati dalam contoh diperoleh dengan mengalikan berat glukosa dengan 0,9. Angka 0,9 adalah faktor konversi untuk pembentukan glukosa dari hidrolisa pati.   

 

Perhitungan kadar amilosa ditentukan dengan menggunakan kurva standar, dengan menggunakan rumus:

Kadar amilosa (%) = (CxVxFPx100)/W

Dimana,

C         = konsentrasi amilosa contoh dari kurva standar (mg/ml)

V         = volume akhir contog (ml)

FP       = faktor pengenceran

W        = berat contoh (mg)

Kadar amilopektin (%) = Kadar pati (%) – Kadar amilosa (%)

 

Demikian penjelasan mengenai Analisa Kuantitatif untuk Identifikasi Karbohidrat Part III. Untuk bagian selanjutnya silakan ditunggu ya. Semoga bermanfaat !!!

1 2