Analisa Kuantitatif Karbohidrat Part II

By All About Knowledge at September 05, 2017

Karbohidrat dengan zat tertentu akan menghasilkan warna tertentu yg dapat dgunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif. Sebelumnya telah saya jelaskan mengenai analisa kualitatif, sekarang akan saya jelaskan mengenai analisa kuantitatif.

Beberapa reaksi yg lebih spesifik dpt membedakan golongan karbohidrat. Banyak cara untuk mengetahui atau mengidentifikasi karbohidrat dalam suatu bahan alam, diantaranya adalah sebagai berikut:

 

3. Analisis gula reduksi (Metode Lane-Eynon)

Gula pereduksi dalam bahan pangan dapat ditentukan konsentrasinya berdasarkan pada kemampuannya untuk mereduksi pereaksi lain. Analisis gula pereduksi dengan metode Lane-Eynon dilakukan secara volumetri dengan titrasi/titrimetri. Metode ini digunakan untuk penentuan gula pereduksi dalam bahan padat atau cair seperti laktosa, glukosa, fruktosa, maltosa.

 

Prinsip :

Metode Lane-Eynon didasarkan pada reaksi reduksi pereaksi Fehling oleh gula-gula pereduksi. Penetapan gula pereduksi dengan melakukan pengukuran volume larutan gula pereduksi standar yang dibutuhkan untuk mereduksi pereaksi tembaga (II) basa menjadi tembaga (II) oksida (Cu₂O).

Udara yang mempengaruhi reaksi dikeluarkan dari campuran reaktan dengan cara mendidihkan laruta selama titrasi. Titik akhir titrasi ditunjukkan dengan metilen blue yang warnanya akan hilang karena kelebihan gula pereduksi di atas jumlah yang dibutuhkan untuk mereduksi semua tembaga. 

Pereaksi yang digunakan adalah Fehling A berisi tembaga (II) yaitu CuSO₄.5H₂O dan H₂SO₄ serta Fehling B berisi garam Rochelle atau potasium sodium tartat teirahidrat (KnaC₄H₆O₆.4H₂O) dan NaOH.

 

Prosedur :

Standarisasi  larutan fehling :

1.  Masukkan 10 ml laruta campuran Fehling A dan B kedalam erlenmeyer dan tambah 2-4 tetes metilen blue 0,2%.

2.  Kemudian lakukan tahapan seperti pada analisis contoh.

 

Analisis contoh :

1.    Campurkan larutan fehling A dan B dengan volume yang sama

2.    Pipet 10 ml larutan dari hasil persiapan contoh kedalam erlemeyer

3.    Tambahkan kedalam erlenmeyer 10 ml larutan campuran fehling A dan B serta 2-4 tetes metilen blu 0,2 %.

4.    Panaskan campura larutan di atas hot plate magnetic stirrer

5.    Setelah mendidih, lakukan titrasi sengan larutan gula standart sampai warna biru hilang

6.    Titrasi dilakukan dengan cepat, maka perlu ditambahkan larutan glukosa standar dengan volume tertentu.

 

Perhitungan dalam metode ini adalah sebagai berikut.

Gula pereduksi (%) = [(V_0­-V_s)xGxT_sxFx100]/(TxW)

Dimana:

V_o        = volume larutan glukosa standar untuk titrasi larutan Fehling (ml)

V_s        = volume larutan glukosa standar untuk titrasi contoh (ml)

G         = konsentrasi larutan glukosa standar (g/ml)

T_s         = volume contoh total dari persiapan contoh (ml)

T          = volume contoh yang diperlukan untuk titrasi (ml)

W        = berat contoh (g)

F          = faktor pengenceran

 

 

4. Analisis Gula Reduksi (Nelson-Somogyi)

Dalam menentukan gula pereduksi dalam bahan padat atau cair perlu persiapan contoh gula terlebih dahulu. Dalam metode ini digunakan pereaksi tembaga sulfat yanng mengandung Na₂HPO₄, sodium potasium tartrat, NaOH, CuSO₄, Na₂SO_4- dan pereaksi arsenomolibdat yang mengandung amonium molibdat, H₂SO₄, Na₂H₂SO₄.7H₂O.

 

Prinsip :

Metode Nelson-Somogyi didasarkan pada reaksi reduksi pereaksi tembaga sulfat oleh gula-gula pereduksi. Gula pereduksi mereduksi pereaksi tembaga (II) basa menjadi tembaga (I) oksida (Cu₂O).

Cu₂O ini bersama dengan arsenomolibdat membentuk senyawa komplek berwarna. Intensitas warna menunjukkan banyaknya gula pereduksi dengan pengujian menggunakan λ=520 nm.

 

Prosedur Kerja

Pembuatan kurva standar

1.    Siapkan 6 tabung reaksi masing masing diisi dengan 0; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 dan 1 ml larutan glukosa standar.

2.    Tambahkan aquadest dalam tiap tiap tabung tersebut sehingga volume untuk tiap-tiap tabung mencapai 1 ml

3.    Tambahkan 1 ml reagensia Nelson pada tiap-tiap tabung dan panaskan dalam air mendidih selama 20 menit

4.    Dinginkan semua tabung dengan cara direndam dalam air dingin hingga suhu mencapai 25⁰C

5.    Tambahkan 1 ml reagen Arsenomolibdat pada tiap-tiap tabung, kocok homogen sampai semua endapan kuprooksida larut semua.

6.    Tambahkan 7 ml aquadest,kocok homogen

7.    Tera absorbansinya pada λ 540 nm dengan spektrofotometer

8.    Buat kurva standar hubungan antara absorbansi dan konsentrasi

9.    Tentukan persamaan kurva standarnya

 

Penentuan kadar gula reduksi sampel:

1.    Ambil 1 ml larutan sampel jernih, lakukan prosedur yang sama dengan pembuatan kurva standar mulai dari no. 3 – 7.

2.    Tentukan kadar gula reduksi sampel dengan menggunakan persamaan kurva standar.

 

Perhitungan dalam metode ini adalah kandungan gula pereduksi dalam contoh ditentukan dengan menggunakan kurva standar (hubungan antara konsentrasi gula standar dengan absorbans) dan memperhitungkan pengenceran yang dilakukan.

Apabila kandungan gula pereduksi diketahui, maka kandungan gula non-pereduksi dapat ditentukan sebagai selisih antara kadar total gula dengan kadar gula pereduksi.

Total gula = gula pereduksi + gula non-reduksi

 

Demikian penjelasan mengenai Analisa Kuantitatif untuk Identifikasi Karbohidrat Part II. Untuk bagian selanjutnya silakan ditunggu ya. Semoga bermanfaat !!!

 

1 2