Analisa Kuantitatif Karbohidrat Part I

By All About Knowledge at September 03, 2017

Karbohidrat dengan zat tertentu akan menghasilkan warna tertentu yg dapat dgunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif. Sebelumnya telah saya jelaskan mengenai analisa kualitatif, sekarang akan saya jelaskan mengenai analisa kuantitatif.

Beberapa reaksi yg lebih spesifik dpt membedakan golongan karbohidrat. Banyak cara untuk mengetahui atau mengidentifikasi karbohidrat dalam suatu bahan alam, diantaranya adalah sebagai berikut:

 

1. Analisis total gula (Metode Anthrone)

Gula dapat bereaksi dengan sejumlah pereaksi menghasilkan warna spesifik. Intensitas warna dipengaruhi oleh konsentrasi gula. Intensitas warna yang terbentuk diukur dengan spektofotometer.

Pereaksi Anthrone (9,10-dihidro-9-oksoantrasena) 0,1% dalam asam sulfat pekat. Pereaksi Anthrone bereaksii dengan karbohidrat dalam asam sulfat pekat menghasilkan warna biru kehijauan. Intensitas absorbansnya diukur pada λ=630nm. Metode ini digunakan untuk analisis total gula bahan padat atau cair.

 

Prinsip :

Prinsip dasar dari metode anthrone adalah senyawa anthrone akan bereaksi secara spesifik dengan karbohidrat dalam asam sulfat pekat menghasilkan warna biru kehijauan yang khas. Senyawa anthrone (9,10-dihydro-9- oxanthracene) merupakan hasil reduksi anthraquinone.

 

Prosedur kerja

Pembuatan kurva standar :

1.    Kedalam tabung reaksi bertutup, pipet larutan glukosa standar sebanyak 0,2;0,4;0,6;0,8; dan 1,0 ml (glukosa standar 0,2 mg/ml), lalu encerkan sehingga total volume masing-masing tabung 1,0 ml.

2.    Buat larutan blanko dengan cara memipet 1 ml air destilata ke dalam tabung reaksi lain.

3.    Tambahkan pereaksi 5 ml Anthrone dengan cepat ke dalam larutan glukosa standard an blanko kemudian tutup. Voertex dan kocok hingga merata.

4.    Panaskan tabung reaksi di atas penangas air 100^oC selama 12 menit. Dinginkan 

5.    Pindahkan larutan ke dalam kuvet dan baca absorbans dengan UV-Vis spektrofotometer pada 630 nm.

6.    Buat plot kurva yaitu konsentrasi (g) glukosa standar pada sumbu x dan nilai absorbans pada sumbu y.

Analisis contoh :

1.    Lakukan pengenceran contoh

2.    Masukkan sebanyak 1ml contoh kedalam tabung reaksi tertutup

3.    Lakukan tahap seperti pada pembuatan kurva standar

 

Perhitungan metode ini adalah dengan menentukan konsentrasi gula dalam contoh mengguanakan kurva standar (hubungan antara konsentrasi gula standar dengan absorbans) dan memperhitunkan pengenceran yang dilakukan. Rumusnya dapat ditulis sebagai berikut.

Total gula (%) = ((GxFP)/W)x100

Dimana:

G         = konsentrasi gula dari kurva standar (gram)

FP       = faktor pengenceran

W        = berat contoh (gram)

 

Sudah pernah dengar lagu Klasik berikut? Coba di-klik deh

 

2. Analisis total gula (Metode Fenol)

Metode ini digunakan untuk menetapkan total gula semua bahan pangan. Sebelumnya contoh harus disiapkan seperti pada persiapan contoh untuk analisis gula.

 

Prinsip :

Gula sederhana, oligosakarida, polisakarida, dan turunannya dapat bereaksi dengan fenol dalam asam sulfat pekat menghasilkan warna oranye kekuningan yang stabil.

 

Prosedur:

Pembuatan kurva standar :

1.    Ambil sebanyak 2 ml larutan pada beberapa konsentrasi

2.    Tambahkan 1 ml larutan fenol (5%), lakukan vortex

3.    Tambahakan 5 ml larutan asam sulfat pekat dengan cepat secara tegak lurus kepermukaan cairan

4.    Diamkan selama 10 menit, vorteks, dan tempatkan dalam penangas air selama 15 menitUkur absorbansnya pada 490 nm untuk hekstosa sedangkan untuk pentosa dan asam uronat 480 nm.

5.    Buat plot kurva standar. Lalu tentukan persamaan regresi linier.

 

Analisis contoh

1.    Lakukan pengenceran contoh

2.    Masukkan 2ml contoh ke dalam tabung reaksi dan lakukan  tahap seperti pada pembuatan kurva standar.

 

Perhitungan menggunakan metode fenol adalah konsentrasi gula dalam contoh ditentukan dengan menggunakan kurva standar (hubungan antara konsentrasi gula standar dengan absorbans) dan memperhitungkan pengenceran yang dilakukan. Rumus perhitungannya dapat ditulis sebagai berikut.

Total gula (%) = ((GxFP)/W)x100

Dimana:

G        = konsentrasi gula dari kurva standar (gram)

FP       = faktor pengenceran

W        = berat contoh (gram)

 

Demikian penjelasan mengenai Analisa Kuantitatif untuk Identifikasi Karbohidrat Part I. Untuk bagian selanjutnya silakan ditunggu ya. Semoga bermanfaat !!!

 

1 2